「聖肛女」はタイトルそのままに「聖女（シスター）」の「アナル」を徹底的に開発/○○していくノベルタイプアドベンチャーゲームである。ノーマルのアナルセックス以外にも非常に数多くの「器具」が登場し、「パールビーズ」「拡張用バルーン」「クスコ（アナル用）」等、様々なものでシスターを○○していく。また、サブキャラに関してもTRYならではのこだわりがふんだんに盛り込まれており、 最後まで楽しめる作品になっている。

主人公はもと神父だが、現在は教会には所属していない○罪者。今では様々な○罪や後ろ暗いことに手を染めている。
今回、とある町での宝石○奪計画を立案、相棒のリズと共にこれを実行。計画を成功させた後、リズと共に逃亡する主人公だったが、彼はあらかじめ逃亡先として今作のヒロイン、シスター・ロザリアのいる村の教会を選んでいた。

そして、その教会に訪れる予定だった巡察官の神父を襲い、自ら巡察官の神父としてすりかわる主人公。教会を訪れる主人公とリズ。主人公を見て顔色を変えるロザリア。主人公とロザリアは旧知の間柄であり、彼女は過去、脅迫めいたやり口で無理矢理主人公と変態的な肉体関係を持たされていたのだが、何とか逃げてこの教会にやって来ていたのだった。

怯え、狼狽するロザリアをよそにそのまま教会に居座り、ほとぼりがさめるのを待つつもりの主人公。当然、その間に久しぶりに会ったロザリアの肉体を思う存分楽しむつもりでもある（というか、ロザリアとの再会もこの計画を立案したときの主人公の大きな目的の一つ）。

こうして、平和な暮らしを営んでいたロザリアにとって、再び悪夢のような淫らで恐ろしい日々が始まった……。